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Bio X Cell隱藏好物助力流式實驗降本增效

更新時間:2025-06-23   點擊次數(shù):425次

關(guān)稅大戰(zhàn)按下暫停鍵,流式er驚魂未定,美國產(chǎn)試劑漲價預(yù)警,流式實驗如何降本增效?

Bio X Cell(國內(nèi)一級授權(quán)代理商生物)以其高品質(zhì)的體內(nèi)功能級抗體享-譽全-球,鮮為人知的是B家還有不少在體外實驗中應(yīng)用廣泛的隱藏好物,今天我們就來聊聊用于Fc受體阻斷的抗小鼠CD16/CD32抗體。

 


為什么要阻斷Fc受體

抗體的結(jié)構(gòu)是一個 Y 型,由高度可變的抗原結(jié)合片段(Fab段,fragment antigen-binding)和可結(jié)晶片段(Fc段,fragment crystallizable)組成,前者負(fù)責(zé)識別和結(jié)合抗原,后者通過結(jié)合Fc受體(FcR)介導(dǎo)其他免疫途徑的效應(yīng)功能,比如抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和吞噬作用,抗原提呈,以及趨化因子和細(xì)胞因子的分泌[1,2]。

 


而在基于抗原-抗體反應(yīng)的細(xì)胞分析比如流式實驗中,F(xiàn)c受體與抗體Fc段的結(jié)合卻會成為干擾因素,產(chǎn)生抗原檢測的假陽性信號。Fc受體阻斷就是在檢測抗體孵育之前先封閉掉Fc受體。


抗體結(jié)構(gòu)示意.png

圖1 抗體結(jié)構(gòu)示意

 

Fc受體的表達(dá)與分類

抗體的恒定區(qū)決定了抗體的同種型,F(xiàn)c受體根據(jù)所結(jié)合的抗體同種型分類,以日常實驗和臨床藥物研發(fā)中使用最多的IgG為例,其Fc受體稱為FcγR。人和小鼠有三個FcγR亞家族,包括高親和力、能夠結(jié)合單體IgG的FcγRI(CD64),低親和力、主要結(jié)合抗原-抗體免疫復(fù)合物(IC IgG)的FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。此外,小鼠還有獨-特的高親和力 FcγRIV(CD16.2)[2]。

 

大部分免疫細(xì)胞尤其是髓系細(xì)胞表達(dá)FcγR,比如在小鼠中,巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞高表達(dá)幾乎所有類型FcγR,樹突狀細(xì)胞也表達(dá)多種FcγR,中性粒細(xì)胞表達(dá)FcγRIV(CD16.2)和FcγRIII(CD16),B細(xì)胞主要表達(dá)FcγRII(CD32),NK細(xì)胞表達(dá)FcγRIII(CD16) [2,3]

小鼠FcγR的表達(dá)模式及與小鼠IgG1、IgG2a/c和IgG2b的親和力

圖2 小鼠FcγR的表達(dá)模式及與小鼠IgG1、IgG2a/c和IgG2b的親和力[2]

 

什么時候要做Fc受體阻斷

研究高表達(dá)Fc受體的細(xì)胞類型,比如單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,必須要做Fc受體阻斷。Andersen等人詳細(xì)測定了流式實驗中的Fc受體結(jié)合,發(fā)現(xiàn)人外周血單個核細(xì)胞和單核來源巨噬細(xì)胞與小鼠IgG1和IgG2a有很強(qiáng)的非特異結(jié)合,而商業(yè)化Fc 阻斷劑、小鼠或人血清,或是高濃度的小鼠或人IgG都能消除這種非特異信號[4]。

如果關(guān)注的不是免疫細(xì)胞,比如腫瘤細(xì)胞,當(dāng)樣本可能富含免疫細(xì)胞,像是實體腫瘤的細(xì)胞懸液,仍然需要避免腫瘤浸潤白細(xì)胞的影響。一般來講,實體組織來源的原代細(xì)胞在做流式實驗時都需要進(jìn)行Fc受體阻斷。另外,對于表達(dá)水平較低的指標(biāo),或是較為稀有的細(xì)胞,F(xiàn)c受體阻斷能夠降低噪音,提高靈敏度。

人外周血單個核細(xì)胞使用不同F(xiàn)c受體阻斷試劑時不同同型對照的中位熒光強(qiáng)度

圖3 人外周血單個核細(xì)胞使用不同F(xiàn)c受體阻斷試劑時不同同型對照的中位熒光強(qiáng)度[4]

 


然而并非所有流式實驗都需要進(jìn)行Fc受體阻斷。明確的不表達(dá)Fc受體的細(xì)胞系,或是高純度的不表達(dá)Fc受體的細(xì)胞,比如腫瘤細(xì)胞、上皮細(xì)胞、T細(xì)胞,沒有抗體結(jié)合Fc受體的風(fēng)險。而使用Fc段突變改造消除Fc受體結(jié)合能力的重組抗體能夠從根源上避免這類假陽性信號。


 

Bio X Cell隱藏好物,抗小鼠CD16/CD32抗體

大家可能從前面的參考文獻(xiàn)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了,多種試劑都能阻斷Fc受體。其中商品化的Fc受體阻斷劑多為純化的Fc受體的抗體,比如常見的小鼠Fc受體阻斷劑就是小鼠CD16/CD32的抗體,比血清的批間一致性更高,比所有IgG混合物的特異性更強(qiáng)。這里我們推薦B家抗小鼠CD16/CD32抗體,助您實驗降本增效:


  • 信息透明:成分、克隆和濃度信息一-應(yīng)俱-全,InVivoMAb anti-mouse CD16/CD32(#BE0307)克隆2.4G2,同種型為大鼠IgG2b,與小鼠 CD16和 CD32的共有表位特異性反應(yīng),還有報道能非特異結(jié)合 FcγRI。注意如果在免疫檢測中需要使用二抗,不能用抗大鼠 IgG2b抗體。

  • 充分驗證:克隆2.4G2的分離與鑒定最早發(fā)表于1979年[5],現(xiàn)在是最-常用的小鼠Fc受體阻斷劑克隆之一。根據(jù)CiteAb網(wǎng)站統(tǒng)計,#BE0307的引用文獻(xiàn)已達(dá)280篇,覆蓋流式、免疫熒光、磁珠分選和功能實驗等諸多應(yīng)用。

  • 廣泛適用:#BE0307屬于InVivoMAb系列,高純度(>95%),低內(nèi)毒素(<2EU/mg),尤其適合后續(xù)功能實驗,甚至可以用于體內(nèi)阻斷。Bio X Cell還提供內(nèi)毒素低于1EU/mg的InVivoPlus版本(#BP0307)。

 


文獻(xiàn)案例

Arlauckas等人[6]為了探究為何有時腫瘤不響應(yīng)PD-1單抗治療,利用體內(nèi)熒光顯微成像追蹤PD-1單抗在腫瘤微環(huán)境中的動態(tài),發(fā)現(xiàn)抗體藥在給藥后幾分鐘內(nèi)即有效結(jié)合瘤浸潤的PD-1? CD8? T細(xì)胞,但是隨后從T細(xì)胞表面被腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)“搶奪"并內(nèi)吞,限制了藥物的持續(xù)作用。隨后應(yīng)用抗小鼠CD16/CD32抗體進(jìn)行體內(nèi)外實驗,證實TAM對PD-1抗體的“搶奪"依賴于Fc-FcγR的互作。

o  體外共培養(yǎng)實驗:將熒光標(biāo)記的PD-1抗體與T細(xì)胞預(yù)孵育,再與骨髓來源巨噬細(xì)胞共培養(yǎng),在體系中加入抗體阻斷FcγRII/III,能夠顯著減少PD-1抗體熒光從T細(xì)胞向巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

o  小鼠體內(nèi)實驗:在PD-1單抗給藥前連續(xù)5天每天腹腔注射200μg小鼠CD16/CD32抗體,阻斷外周巨噬細(xì)胞上的FcγRII/III,顯著延長PD-1單抗與腫瘤浸潤C(jī)D8? T細(xì)胞的結(jié)合時長,并且徹-底消除了不響應(yīng)者,聯(lián)合給藥在所有小鼠中實現(xiàn)腫瘤消除。

體外共培養(yǎng)實驗證實PD-1抗體從T細(xì)胞表面向巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)移由FcγRII/III介導(dǎo)

圖4 體外共培養(yǎng)實驗證實PD-1抗體從T細(xì)胞表面向巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)移由FcγRII/III介導(dǎo)

 

體內(nèi)阻斷FcγR在MC38小鼠模型中延長PD-1單抗與T細(xì)胞的結(jié)合時長,提高治療效果

圖5 體內(nèi)阻斷FcγR在MC38小鼠模型中延長PD-1單抗與T細(xì)胞的結(jié)合時長,提高治療效果

 


最后悄悄說,抗小鼠CD16/CD32抗體延續(xù)了B家體內(nèi)抗體傳統(tǒng),相同克隆按實際抗體含量計算,性-價-比超-高,很多機(jī)智的大牛實驗室已經(jīng)用來發(fā)頂刊啦。如果您想了解這一抗體的更多應(yīng)用案例、使用方法和購買信息,歡迎聯(lián)系我們或咨詢我們在中國的一級授權(quán)代理商欣博盛生物。

 


參考文獻(xiàn)

1. Nimmerjahn, F, Ravetch, JV (2008) Fcγ receptors as regulators of immune responses. Nat Rev Immunol. 8(1):34-47. doi: 10.1038/nri2206.

2. Galvez-Cancino, F, et al (2024) Fcγ receptors and immunomodulatory antibodies in cancer. Nat Rev Cancer. 24(1):51-71. doi: 10.1038/s41568-023-00637-8.

3. Guilliams, M, et al (2014) The function of Fcγ receptors in dendritic cells and macrophages. Nat Rev Immunol. 14(2):94-108. doi: 10.1038/nri3582.

4. Andersen, MN, et al (2016) Elimination of erroneous results in flow cytometry caused by antibody binding to Fc receptors on human monocytes and macrophages. Cytometry A. 89(11):1001-1009. doi: 10.1002/cyto.a.22995.

5. Unkeless, JC (1979) Characterization of a monoclonal antibody directed against mouse macrophage and lymphocyte Fc receptors. J Exp Med. 150(3):580-596. doi: 10.1084/jem.150.3.580.

6. Arlauckas, SP, et al (2017) In vivo imaging reveals a tumor-associated macrophage-mediated resistance pathway in anti-PD-1 therapy. Sci Transl Med. 9(389):eaal3604. doi: 10.1126/scitranslmed.aal3604.


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